myPOLS Biotec正在開發新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應用，例如個性化醫療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫學等等。

我們的研發活動包括：

• 改進的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
• 病原體檢測分析，例如用于流感和諾如病毒診斷。
• 具有逆轉錄酶活性的熱穩定DNA聚合酶。
• 抑制劑抗性聚合酶，用于從樣品中直接PCR，如全血，唾液，細菌，細胞 - 顆粒，植物等。 

后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內部生產的，并經過常規測試，符合高質量標準。

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設計方面的專業知識，我們為您的應用定制酶。

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix

包含所有必需的組分，包括dNTP和優化的反應緩沖液，可在所有標準PCR循環儀中實現成功可靠的實時qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我們的*表現，熱啟動配方，工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物組成。該混合物被設計成適合多重PCR，病原體檢測qPCR和各種基于探針的DNA和RNA靶標的qPCR。 

包含的Volcano3G DNA聚合酶是一種工程化的，極其熱穩定的逆轉錄酶和組合的DNA聚合酶，通過定向的人工進化獲得。基于適體的DNA聚合酶的熱啟動制劑防止錯誤擴增。高于50°-55°C的溫度會使適體的二級結構熔化并使聚合酶釋放。 

 應用

• 快速檢測和鑒定RNA和DNA靶標
• 逆轉錄qPCRs（RT-qPCRs）
• qPCRs（DNA或RNA目標）
• 多重PCR
• 實時PCR
• 基于探針的PCR
• 病原體檢測
• 入門擴展 
• 終點PCR
• 篩選/高通量PCR
• SELEX

典型的RT-PCR方案

可以使用兩步法和三步法PCR方案。

* = Volcano3G DNA聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR（沒有等溫逆轉錄步驟），因為逆轉錄也在循環PCR延伸步驟期間與DNA擴增同時發生。因此，逆轉錄步驟是任選的，并且在某些情況下可以省略。

** =通過運行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR，以便找到每個引物對的*逆轉錄/退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應緩沖液組成（鹽和pH）的強烈影響。

通常，Volcano3G DNA聚合酶是*熱穩定的，并且在55-95°C之間活躍。

反應設置

使用的實驗建議：

在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進行PCR，以找到測定的宜溫度。

大多數RT-PCR分析在短時間80℃（1分鐘）變性步驟和50-55℃（10分鐘）的逆轉錄步驟以及標準PCR循環條件下都能很好地起作用。

建議的反應設置 

* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（總RNA或基因組DNA）之間。

在使用前仔細旋轉并混合所有溶液。

質量控制

RT-PCR活性：測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環儀中從人總RNA提取物擴增151bp片段（HPRT1 mRNA），并將其顯示為單個擴增產物。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監測Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質特異性染色確定。有關批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。

存儲

本產品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產品。
通過以等分試樣存儲來小化凍融循環的次數。對于日常使用，我們建議將等分試樣保持在4°C。

Volcano3G是否具有RNAse-H樣活性？

Volcano3G來自Taq DNA聚合酶，因此它沒有任何RNase-H活性。在循環PCR延伸步驟期間，逆轉錄與DNA擴增同時發生。

然而，Volcano3G具有核酸酶結構域作為Taq野生型酶，可用于基于水解的實時PCR。 

我怎樣才能將擴增限制在mRNA靶標上？

我只獲得引物二聚體。如何建立我的RT-PCR？

我可以用Volcano逆轉錄長RNA鏈（> 500 bp）嗎？

我在瓊脂糖凝膠上看到一個低分子帶 - 這是Volcano3G RT PCR Mix的污染嗎？

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