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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章arcticzymes PCR去污試劑盒說明書

arcticzymes PCR去污試劑盒說明書

更新時間:2019-05-15點擊次數(shù):1944

arcticzymes PCR去污試劑盒說明書

PCR Decontamination Kit

PCR去污試劑盒

規(guī)格

貨號

價格

Pack size: 100 rxn

#80400-100

€94

Pack size: 500 rxn

#80400-500

€455

PCR去污試劑盒可去除PCR預(yù)混液中的污染DNA,而不會降低PCR靈敏度。

  • dsDNase的雙鏈特異性允許用引物和探針進行凈化。
  • 有效用于終點PCR和基于探針的qPCR。
  • 污染細(xì)菌DNA降至檢測限以下。
  • 快速簡便的協(xié)議。

在不降低靈敏度的情況下對主混合物進行凈化一直是一個挑戰(zhàn)。特別是當(dāng)靶向少量DNA時,污染DNA是一個主要問題。由去污方案引起的qPCR測定中的任何靈敏度損失都是不可接受的。

 

 

套件內(nèi)容:

  • DTT(滅活援助)
  • dsDNase

協(xié)議

PCR去污試劑盒方案

 

圖1:PCR去污試劑盒方案

  1. 將引物和探針與主混合物和試劑盒內(nèi)容混合
  2. 在37?C孵育20分鐘
  3. 在60?C下滅活20分鐘
  4. 添加模板并運行qPCR

在DTT存在下,dsDNase在60℃時不可逆地失活,確保滅活后添加的任何模板都能安全地消化。

從20μl反應(yīng)中去除污染DNA的方案,但可以通過調(diào)整試劑盒內(nèi)容物的體積來放大或縮小。

500 pg untreated50 pg untreated5 pg untreated500 fg untreated50 fg untreatedNTC untreated500 pg decontaminated50 pg decontaminated5 pg decontaminated500 fg decontaminated50 fg decontaminatedNTC decontaminated5101520253035404502,5005,0007,50010,00012,50015,000Cycles14500 pg untreated:3450 pg untreated:-45 pg untreated:-5500 fg untreated:-1350 fg untreated:12NTC untreated:1500 pg decontaminated:1650 pg decontaminated:-125 pg decontaminated:-750 fg decontaminated:-9NTC decontaminated:22

周期500 pg untreated50 pg untreated5 pg untreated500 fg untreated50 fg untreatedNTC untreated500 pg decontaminated50 pg decontaminated5 pg decontaminated500 fg decontaminated50 fg decontaminatedNTC decontaminated
1-217-38-13-63-12-7-13313-10131721
2-107-222-36-9-22-5514-11-38-10
3-69-10-1-23-20-26-2710-1-1212-39
4-46-12-12-20-14-13 6-68-44
5-29743-7-4-4-2554-63
6-1196811151-694-63
76511 129152-411-7-44
812-3126-7136811121-29
93-17314-412-13914-58-12
10-15-16-71466-8-59-415
11-222-9524-1-997620
12-213-5-2-313-103814514
13-2-11-4222-5-2-314-211
1434-4-5-1312116-12-7 -922
1589 -3-168760-32-9-519
162041-20-9-131622-15-22-1025
1741620-31-9-10437111-33-24-1735
1876470-16-12-5-174657-26-14-1729
191,2971731-22-7-61,310154-16-1-2221
202,01534715-21-25-102,04934482-1513
212,88664446-20-27-162,91565751-8-15
223,8651,115122-7-27-283,8791,122127-758
234,8791,77426110-33-324,9081,7642704-220
245,9192,59750835-24-215,9272,57652734-2026
256,9513,525921101-2-226,8923,51496094-2225
267,9304,5261,52022114-137,8554,5051,587209310
278,8185,5262,30142637-58,7715,4952,406434368
289,6286,5113,2427789929,5706,4733,3578089311
2910,3807,4724,2781,337192910,2917,4224,3841,3751995
3011,0378,3715,3462,1013824310,9408,3065,4452,1463936
3111,6469,2106,4003,04772110111,5249,0966,4893,0977274
3212,1849,9857,4174,1321,22918212,0429,8147,4964,1491,261-15
3312,62710,6948,4025,2741,98034412,48210,4828,4655,2542,018-24
3413,00111,3179,2916,4092,94558612,83611,0759,3876,3932,961-6
3513,33411,85810,1017,4984,07194413,11311,61610,2007,4924,0663
3613,63112,32910,8478,5665,2761,44413,35612,07210,9028,5205,2316
3713,87812,74011,5229,5946,4822,08813,54712,44211,5419,4826,4159
3814,08013,06412,09110,5097,6942,87113,71812,78512,09710,3647,582-11
3914,23513,34112,56211,3648,8803,79313,87613,06412,57611,1788,696-27
4014,34713,58012,97712,1119,9654,81713,97913,26712,98811,9059,747-14
4114,44313,78513,32912,77310,9405,84814,06813,46213,29012,53310,676-16
4214,51113,95413,61713,35511,8276,87114,15913,62013,54713,05311,496-35
4314,54214,06813,84413,83912,6027,89514,22413,73913,80313,46912,202-22
4414,59714,19514,03314,27613,3098,87114,28013,85114,02213,81412,798 
4514,66414,33214,21714,68914,0229,82414,34713,95214,23414,14713,38513

圖2:未處理和去污染的qPCR 2x主混合物用于分析具有5個步驟的大腸桿菌gDNA 10倍系列稀釋。包括NTC樣品,并且連續(xù)稀釋的所有圖顯示平均三次重復(fù)。

使用PCR去污試劑盒進行治療不會降低PCR的靈敏度。即使稀釋DNA,Cq水平也沒有顯著改變(圖2)。

套件內(nèi)容

  • DTT(滅活援助)
  • dsDNase(100個反應(yīng))

儲存條件:儲存在-20?C。
樣品材料:該試劑盒可用于減少普通PCR和基于探針的qPCR混合物中的污染DNA。對于一些基于SYBR的qPCR混合物也是有效的。
質(zhì)量控制:測試試劑盒中是否存在RNase。

出版物

  1. 使用二元脫氧核糖核酸酶傳感器多重檢測廣泛耐藥結(jié)核病。
    Bengtson,HN; Homolka,S。; Niemann,S。; Reis,AJ; 達席爾瓦,PE; Gerasimova,YV; Kolpashchikov,DM; Rohde,KH(2017)
    Biosens Bioelectron 2017,94,176-183。
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