是的。重要的是檢查支原體是否已被MycoRAZOR®（例如，通過使用MycoSPY®或MycoSPY® Master Mix）*消除，以防止產生耐藥性。由于耐藥性的產生方式與所有抗生素的使用方式相同，因此*消除支原體至關重要。

首先檢查是否在上次使用MycoRAZOR®和當前測試之間進行了兩次未使用MycoRAZOR®的傳代。如果不是這種情況，則可能已檢測到死支原體，特別是通過高度敏感的方法，例如 PCR。如果觀察到最后一次應用和測試之間的最短時間，請在接下來的五次細胞傳代中使用MycoRAZOR®，逐漸增加MycoRAZOR®的劑量，最大稀釋度為 1/25。請注意，根據細胞類型，增加MycoRAZOR®的濃度可能會產生毒性作用. 如果您在細胞中觀察到毒性作用（增殖率降低；細胞形態變化），請在剩余周期中使用最后一次使用的劑量。必須使用支原體檢測試劑盒（例如MycoSPY®或MycoSPY® Master Mix）測試每種治療的結果！

細胞培養中使用的動物產品是支原體污染的主要來源。為避免這種風險，請僅使用保證不含支原體的胎牛血清 (FBS) 和胰蛋白酶。
支原體屬于 Mollicutes 類，因此缺乏細胞壁，它們對許多攻擊細胞壁合成的抗生素具有抗性。因此，在將此類抗生素（例如青霉素/鏈霉素）用于細胞培養的常規使用中，使用者本身是重要的污染源。在這種情況下，非無菌工作條件會被忽視，因為添加抗生素會阻止大多數細菌的生長——從而阻止宏觀效應——同時允許支原體不受阻礙地繁殖。
此外，來自另一種細胞培養物的交叉污染是可能的。出于這個原因，始終測試所有培養的細胞并更換任何可能被污染的細胞培養材料（培養基、FBS、胰蛋白酶、緩沖液）。

第MycoRAZOR®不包含任何doxy-或四環素類抗生素。

大多數基于 PCR 的支原體檢測試劑盒都包含一個質粒作為陽性對照，該質粒編碼支原體的 16S rRNA。這確保了引物的功能。如果存在支原體污染，該質粒產生的 DNA 擴增子的大小與預期的相同或相似。因此，帶有陽性對照的 PCR 必須在單獨的管中進行。通常還包括內部對照，以確保 PCR 不受來自細胞培養上清液的蛋白質和細胞碎片的抑制。內部對照產生與支原體污染的細胞樣本不同長度的 DNA 擴增子。因此，內部控制可以在每種方法中進行。

MycoSPY® Master Mix試劑盒和MycoSPY®試劑盒中包含的內部對照是一種質粒，它編碼支原體 16S rRNA 的縮短形式。因此，內部對照用作陽性對照，并確保對于每種 PCR 方法，細胞培養上清液中不存在抑制劑。因此，它排除了假陰性結果。

兩者MycoSPY®主混合物的試劑盒和MycoSPY®試劑盒檢測至少80份支原體基因組的。內部控制稍微降低了靈敏度。由于支原體在細胞培養物受到污染后繁殖相對較快，因此這種敏感性就足夠了。
因此，我們建議在每次 PCR 中添加內部對照，以確保不存在來自細胞培養上清液的任何現有抑制劑（蛋白質、細胞碎片）。

沒有必要避免使用常規抗生素，例如青霉素、鏈霉素或慶大霉素，因為它們不會抑制MycoSPY® Master Mix Kit 或MycoSPY®試劑盒的檢測。

是的。我們建議在 20°C 下儲存，不含添加劑（例如 DMSO）。解凍后，應按照手冊中的說明制備細胞培養上清液。

我們建議將細胞培養至少 48-72 小時，或直到生長區域的覆蓋率至少達到 80%。對于懸浮細胞，細胞密度應大約在推薦用于傳代培養的細胞數范圍內。由于在細胞培養上清液中檢測到支原體，因此在此期間不應更換培養基。

我們建議至少每 1-2 個月進行一次支原體 PCR（例如使用MycoSPY®或MycoSPY® Master Mix），尤其是在存在抗生素（例如 pen/strep）的情況下培養細胞時。這些抗生素可防止發現未消毒的工作技術，但會導致細胞培養物受到支原體污染。