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活細胞的免疫熒光染色方案

發布時間:2018/7/25點擊次數:3022

ESI BIO的使命是成為客戶信賴的合作伙伴,將科學發現轉化為診所。我們通過提供突破性的干細胞技術作為研究級和治療級產品來實現這一目標,從研究到診所的照明,以幫助我們的客戶實現他們治療疾病的目標。

ESI BIO建立在豐富的創新和科學的基礎之上。我們于2000年在新加坡成立了ES Cell International,在那里我們通過制造個可翻譯的臨床級胚胎干細胞系來創建歷史,以便分發給研究界。

 

ESI BIO現在開展業務Alameda CA. 我們是BioTime,Inc。擁有的以干細胞為基礎的子公司的驕傲家族的成員,我們從中受益于的科學,知識產權和干細胞技術的深層來源。

抗體

 

胚胎干細胞(ESCs)和誘導多能干細胞(iPSCs)的表征是干細胞研究中的關鍵步驟。驗證起始細胞群的常規過程應該簡單,快速,重要的是可靠,以確保準確和一致的結果。ESI BIO為您提供關鍵抗體形式和活體染色工具,這些工具專為干細胞直接開發和測試而開發。

快速而可靠的多能性驗證
ESI BIO的BioLite™抗體可直接染色培養液中的活細胞,因此無需犧牲可用于下游實驗的有價值物質。

· 確認多能性標志物表達

· 允許在染色后繼續細胞培養

· 低內毒素,不含Sodium azide的配方

· 無需固定或透化,僅需孵育30分鐘

 



圖1. [A]小鼠ES細胞的IF分析。用BioLite SSEA-1(Dy-Light 488)抗體染色后培養細胞和相同視野的相差圖。[B] IF重組成人成纖維細胞第11天的原代iPS細胞集落的IF分析。用BioLite TRA-1-81(DyLight 488)抗體染色后培養細胞和相同視野的相差圖。以10X放大率拍攝圖像。

 

活細胞的免疫熒光染色方案  見附件

活細胞免疫熒光染色

描述

本協議描述了用BiLite™抗體直接免疫熒光(IF)染色活細胞的方法。所有的步驟都應該在無菌的工作環境中進行。 g新鮮培養基。請注意:

次使用一種抗體時,建議對抗體進行滴定,以達到特定于細胞類型的*性能。

·細胞可以在多孔板中直接生長、處理和染色。·只需在生物安全柜中打開抗體,以防止可能的污染。

·保護熒光共軛物不受光線照射。所需材料

所需設備

-BioLiteTM抗體(CAT)。否ST11006或貓。否ST11008)

37°C和5% CO2培養箱

細胞培養基

熒光顯微鏡

·多能干細胞

實驗協議

參考技術數據表中推薦的起始濃度,并滴定一次抗體,以獲得*的細胞類型性能。

原抗體在新鮮細胞培養基中稀釋至確定的*濃度

將培養液從細胞孔中吸出染色,直接將稀釋后的抗體加入活細胞的培養井中。

在37℃下用5%CO2孵化器孵育30分鐘。

吸出一次抗體,用新鮮培養基輕輕沖洗兩次。

向井內加入新鮮細胞培養基。

用熒光顯微鏡和適當的濾鏡檢查細胞。

8.將細胞返回孵化器并繼續正常培養。

BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL 

通過免疫熒光染色檢測活的,未固定的多能干細胞群中的SSEA-1表達。

 

ST11006

 

BioLite™表面標記允許對活的,未固定的多能干細胞群進行直接免疫熒光染色??贵w經過細致的應用測試和驗證,以確保它們是無菌的,無毒的,不含Sodium azide,并且不含培養病原體。與未處理的細胞相比,用BioLite抗體染色的菌落能夠在培養中繼續,對增殖和分化潛能沒有不利影響。

背景技術階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)是在早期小鼠胚胎,鼠胚胎癌(EC),鼠胚胎干(ES)和鼠和人胚(EG)細胞表面上表達的碳水化合物表位。未分化的人EC和ES細胞沒有明顯的免疫反應性。人EC的分化導致SSEA-1表達的增加,而小鼠的表達減少。SSEA-1與細胞粘附,遷移和分化有關。

 

濃度 0.5毫克/毫升

物種反應性 人類,老鼠

主辦 小鼠單克隆

克隆 MC-480

同型 IgM,κ

免疫原 F9四角癌干細胞(X射線照射)

公式 0.2μm過濾滅菌的磷酸鹽緩沖溶液,pH 7.2,不含防腐劑。通過LAL測試確定,內毒素水平<0.1EU /μg蛋白質(<0.01ng /μg蛋白質)。配方不含細菌,真菌和支原體。

儲存和穩定性 儲存在2-8°C避光。根據指示存放,自收到之日起6個月內穩定。

BioLite格式不含防腐劑,因此必須在無菌條件下處理。

應用程序測試 對活的,未固定的小鼠ES細胞進行免疫熒光(IF)

推薦的稀釋液 免疫熒光1:100

流式細胞儀1:100

建議針對每種應用滴定抗體以獲得*性能。

替代名稱 CD15,階段特異性胚胎抗原1

 

 

貨號

品名

規格

品牌

ST11006

BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11008

BioLite™ TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11023

Nestin anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11003

Oct4 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ST11001

Sox2 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11013

SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ST11014

SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11015

SSEA-4 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11018

TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11016

TRA-1-60 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11017

TRA-1-81 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ES-700

ESI-017 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-701

ESI-035 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

 ES-702

ESI-049 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-703

ESI-051 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

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ES-704

ESI-053 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

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ES-706

Human Embryonic Stem Cell Bundle

ea

esibio

 

 

上海起發實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

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7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發,歡迎合作。

 

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