Bridge It SAM檢測試劑盒介紹

Mediomics Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒

分析性能

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簡單：混合和測量

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快速：培養30分鐘后讀取熒光信號

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靈敏度：分析在0.5µM的靈敏度下限下測量SAM

（即96孔中50 pmol/孔或384孔中20 pmol/孔）

微孔板）

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靈活：在FRET（Bridge It®）和TR-FRET（TR）中都可以進行分析-

FRET Bridge It®）格式

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高信號背景比：Bridge It®分析試劑盒的TR-FRET選項提供了非常高的信號背景比（>30倍），這對于高通量篩選和藥物發現非常有用

*Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒僅用于實驗室研究和開發（研發）目的。本產品未經政府監管部門批準用于人類或動物疾病的診斷或治療、食品監測或實驗室研發以外的任何應用，不得用于此類目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為SAM，SAMe或AdoMet）在所有類型生物體的甲基化生物過程中起著至關重要的作用。在甲基化循環中，SAM充當DNA和蛋白質共價修飾中使用的甲基基團的供體。SAM水平的可變性與衰老過程、許多神經和精神疾病（包括阿爾茨海默病、抑郁癥、HIV相關疾病）有關

神經功能障礙/癡呆、多發性硬化、帕金森病、脊髓變性、癲癇、纖維肌痛、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙、動脈硬化和癌癥。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對SAM進行定量。高效液相色譜法耗時、成本高，而且由于需要大量有機溶劑，對環境不友好。

所有序列特異性DNA結合蛋白的共同特性是，它們能夠以高親和力和特異性結合到包含*核苷酸序列的DNA雙鏈，即蛋白質的DNA結合位點。Mediomics的新型分析平臺設計依賴于這一共同特征。包含給定目標DNA結合蛋白的序列特異性DNA結合位點的DNA雙鏈體被拆分為兩個DNA“半位點"雙鏈體，每個雙鏈體具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短，因此在缺乏靶蛋白的情況下幾乎不會發生自發的r-e結合。

然而，當存在靶蛋白時，其對全長DNA序列的高親和力將驅動兩個半位點DNA雙鏈體的重新結合。這種重新關聯可以通過合并適當的

熒光探針進入兩個DNA半位點中的每一個。DNA結合蛋白的存在被檢測為熒光信號的增加。如下圖所示，這種基本平臺設計的簡單變體允許DNA結合蛋白（黃色卵形）作為其特定配體的敏感生物傳感器發揮作用：

真核細胞大約含有3000個序列特異性DNA結合蛋白。這些重要的蛋白質在有或沒有特定小分子協同調節器（配體）的情況下發揮作用，控制基因組DNA活動的各個方面，包括基因表達、DNA復制和DNA修復。Mediomics正在應用其新型熒光分析平臺開發體外分析，用于快速、靈敏地定量DNA結合蛋白及其小分子配體的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體，與甲硫氨酸阻遏蛋白結合并共同調節其活性。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基于成熟的熒光測量技術和

利用DNA結合蛋白作為生物傳感器的新分析平臺設計

對于各自的小分子co調節器（配體）。DNA序列特異性甲硫氨酸再吸收蛋白對其*DNA的親和力

其配體S腺苷甲硫氨酸的存在大大增加了結合位點。在本試驗中，MetJ共有序列分為兩部分

大約相等的DNA“半位點"，其中一半片段用熒光素標記，另一半片段用Oyster®645熒光團標記。

試樣中SAM的相對含量會影響其含量

DNA MetJ蛋白復合物形成的檢測。當這個復雜

形式，它使熒光標記的DNA半位點非常接近，并導致熒光信號發射的可測量變化（增加），可使用微孔板讀取器輕松測量（波長設置：

吸收485 nm；發射665 nm）。然后使用SAM標準曲線確定測試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法具有非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信號背景比、良好的檢測范圍（~ 0.4μM–100μM）和~ 0.4μM的檢測靈敏度。該檢測水平（~ 0.4μM）有助于在大多數感興趣的測試樣本（包括生物流體）中量化SAM，細胞培養和發酵培養基，以及組織和細胞提取物。該測定可以修改為任何使用SAM作為反應物或產物的酶反應的測定。

Mediomics分析的平板閱讀器設置

對于基于TR-FRET的分析（TR-FRET Bridge It®和TRF-PINCER®）：

330 nm激勵濾波器（帶寬：80 nm）

665 nm發射濾波器（帶寬：7.5 nm）

620 nm發射濾波器（帶寬：40 nm）

應從頂部讀取銘牌。建議的讀取設置為每個數據點50次測量，收集數據前的延遲時間為55μs，數據收集時間為1000μs。

對于基于FRET的分析（Bridge It®和FRET-PINCER®）：

485 nm激勵濾波器（帶寬：20 nm）

665 nm發射濾波器（帶寬：34 nm）

540 nm發射濾波器（帶寬：40 nm）

應從頂部讀取銘牌。建議讀取設置為每個數據點50個測量值。