Mediomics Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸說明書

Bridge-It ® S-Adenosyl Methionine (SAM)

Fluorescence Assay

Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸（SAM）

熒光分析

（96孔微孔板格式）

*

Bridge It®S-腺苷蛋氨酸（SAM）熒光檢測試劑盒僅用于實驗室研究和開發（R&D）。本產品未獲得政府監管部門批準用于診斷或治療人類或動物疾病、監測食品或實驗室研發以外的任何應用，不得用于此類目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為SAM、SAMe或AdoMet）在所有類型生物的甲基化生物過程中起著關鍵作用。在甲基化循環中，SAM充當用于DNA和蛋白質共價修飾的甲基基團的供體。SAM水平的變異性與衰老過程、許多神經和精神疾病，包括阿爾茨海默病、抑郁癥、HIV相關

神經功能障礙/癡呆、多發性硬化、帕金森病、脊髓變性、癲癇、纖維肌痛、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙、動脈硬化和癌癥。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對SAM進行定量。高效液相色譜法耗時、成本高，而且由于需要大量有機溶劑，對環境不友好。

所有序列特異性DNA結合蛋白的共同特性是它們能夠以高親和力和特異性結合到含有核苷酸序列的DNA雙鏈-即蛋白質的DNA結合位點。Mediomics的新型分析平臺設計依賴于這一共同特征。包含給定靶DNA結合蛋白的序列特異性DNA結合位點的DNA雙鏈體被分成兩個DNA“半位點"雙鏈體，每個雙鏈體具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短，使得在沒有靶蛋白的情況下很少發生自發的重新結合。

然而，當靶蛋白存在時，其對全長DNA序列的高親和力將驅動兩個半位點DNA雙鏈體的重新結合。通過將適當的熒光探針結合到兩個DNA半位點的每一個中，可以敏感地檢測這種重新結合。DNA結合蛋白的存在被檢測為熒光信號的增加。如下圖所示，該基本平臺設計的簡單變化允許DNA結合蛋白（黃色橢圓形）作為其特定配體的敏感生物傳感器：

真核細胞含有約3000個序列特異性DNA結合蛋白。這些重要的蛋白質在有或沒有特定的小分子協同調節因子（配體）的情況下起作用，控制基因組DNA活動的所有方面，包括基因表達、DNA復制、基因表達和基因表達，DNA修復醫學組學正在應用其新的熒光分析平臺開發體外分析，用于快速、靈敏地定量DNA結合蛋白及其小分子配體的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體，與MetJ甲硫氨酸阻遏蛋白結合并共同調節其活性。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基于成熟的熒光測量技術和新的分析平臺設計的結合，該平臺利用DNA結合蛋白作為其各自小分子共調節劑（配體）的生物傳感器。DNA序列特異性甲硫氨酸阻遏蛋白對其DNA結合位點的親和力在其配體S-腺苷甲硫氨酸的存在下大大增加。對于該測定，MetJ共有序列被分成兩個大致相等的DNA“半位點"，其中一半片段用熒光素標記，另一半片段用Oyster®645熒光團標記。測試樣品中存在的SAM的相對量將影響測定中DNA-MetJ蛋白復合物形成的量。當這種復合物形成時，它使熒光標記的DNA半位點非常接近，并導致熒光信號發射的可測量變化（增加），可使用微板讀取器（波長設置：

吸收nm；發射665nm）。然后使用SAM標準曲線確定測試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法顯示出非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信號與背景（S/B）比、良好的檢測范圍（~0.4μM–100μM）以及~0.4微米的檢測靈敏度。該檢測水平（~0.4μM）可用于定量大多數感興趣的測試樣品中的SAM，包括生物液體、細胞培養和發酵培養基以及組織和細胞提取物。這個化驗

可以被修改為使用SAM作為反應物或產物的任何酶反應的測定。

測定試劑盒中包含的試劑量足以使用黑色96孔非結合表面微孔板進行所示數量的單個SAM測量。

將SAM測定溶液儲存在-80°C下，直至使用，在該溫度下，SAM測定液將保持其活性長達1年。如果-80°C的冷凍柜不可用，則將SAM測定溶液儲存在-20°C，直到使用，在那里它將保持其活性長達6個月。Bridge It®SAM熒光分析試劑盒的剩余部分可在-20oC下儲存在冰箱中，直至需要使用。僅解凍適當數量的

計劃實驗所需的試劑管。每管SAM測定溶液包含足以使用96孔黑色微孔板進行十（10）次SAM測量的試劑。

將SAM測定溶液在37℃下解凍30分鐘，并在室溫下保存直至使用。任何未使用的試劑可在4°C的冰箱中密封儲存一周。SAM分析試劑盒試劑在-20°C下冷凍保存時，將保持其活性至少2個月。